一步法PAGE彩色凝膠快速制備試劑盒

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產品介紹

本產品適用于 Tris- Glycine電泳體系，包含制備濃縮膠（上層膠）和分離膠（下層膠）的預混溶液，配膠過程無需計算各組分的用量、無需稀釋、無需添加 TEMED，只需將上層膠溶液與上層膠緩沖液、下層膠溶液與下層膠緩沖液分別 1：1混合，加入促凝劑即可凝膠，簡化制備 SDS-PAGE凝膠的操作步驟，可快速灌制多塊凝膠，使制膠過程更加便捷。上層膠帶有顏色使上樣孔清晰可見，便于上樣。本產品配套提供的促凝劑干粉狀 態保存于 2-8℃，溶解后應保存于-20℃。

產品特點： 

1）一步法灌制膠 —依次灌制下層膠和上層膠即可完成制膠； 

2）操作簡單快速 —制膠無需計算各組分用量和準備額外試劑，且凝膠快速； 

3）上層膠為彩色 —彩色的上層膠，便于上樣； 

4）避免惡臭氣味 —無需添加 TEMED，免除臭味擴散。

保存條件

產品可在 2~8℃條件下保存一年。

產品組分

注意：

① 向裝有促凝劑干粉的瓶子中加入 8 ml的 ddH₂O，搖晃溶解，溶解后的促凝劑，建議分裝保存于-20℃；每次使用前需完全融化后，再使用。

② 為保證試劑盒的長時間使用，本試劑盒額外配備一瓶促凝劑干粉，兩瓶促凝劑干粉的使用方法一致。

③ 建議一瓶促凝劑干粉使用完之后，再溶解另一瓶。

使用說明

將制膠玻璃板（務必檢查是否對應正確，例如灌注的是 1.0 mm的膠，那么一定要用對應的 1.0 mm的玻璃板）清洗干凈，裝配好，以制備一塊 mini膠為例（建議先制備下層膠，等下層膠凝固好，再制備上層膠混合液，然后進行上層膠的灌注）：

 1 下層膠的制備：

按照“下層膠配制建議（單片膠）”表格中的用量，根據需要配制的凝膠厚度，分別進行下層膠各個組分的取液。

① 取等體積的膠液 A和緩沖液 A，加入到容器中，輕輕搖晃混勻。

② 在混合溶液中加入促凝劑，輕輕搖晃混勻，避免劇烈震蕩出現過多的氣泡。

③ 將上述混勻后的溶液灌注到裝配好的制膠玻璃板中，根據所用梳齒長度不同，灌注的液面應在插入的梳齒頂端以下 0.5cm為宜（為避免損耗， 此步驟配制的溶液為過量，請勿全部注入）。

④ 建議用 ddH₂O對灌注的下層膠進行封閉（封閉可獲得更加平整的上下層膠分界線，可以獲得更好的跑膠效果）。在下層膠灌注到玻璃板之后， 立即在下層膠液面上緩緩注入 ddH₂O，直至與玻璃膠板短板上沿齊平。

⑤ 等待下層膠凝固后（約為 10 min）倒去上方 ddH₂O，再進行上層膠的制備。

2 上層膠的制備：

按照“上層膠配制建議（單片膠）”表格中的用量，根據需要配制的凝膠厚度，分別進行上層膠各個組分的取液。

① 取等體積的膠液 B和緩沖液 B，加入到容器中，輕輕搖晃混勻。

② 在混合溶液中加入促凝劑，輕輕搖晃混勻，避免劇烈震蕩出現過多的氣泡。

③ 將上述混勻后的溶液輕緩灌注到制膠玻璃板中，直至與玻璃膠板短板上沿齊平，插入對應的梳子（務必檢查使用的梳子是否正確，例如灌注的 是 1.0mm的膠，那么一定要用對應的 1.0 mm梳子）。

④ 等待上層膠凝固后（約為 10 min），即可輕輕拔出梳子進行電泳。

備注：

① 在下層膠灌注后，如果選擇不封閉，那么無需等待下層膠凝固，可以直接進行上層膠的灌注（但是由于此時下層膠尚未凝固，所以在灌注上層膠時，一定要保證操作輕緩，避免將上層膠混合溶液沖入到下層膠混合溶液中，造成灌注的凝膠不均勻）。灌注后，插上對應的梳子，室溫靜置， 等待上/下層膠凝固（約為 10min）后，即可輕輕拔出梳子進行電泳。

② 溫度與凝固的速度有顯著的正相關性。在相同條件下，隨著溫度升高，凝固速度加快。實際操作中可根據氣溫適當調整促凝劑的用量，以達到 合適的凝固效果。不同氣溫條件下促凝劑的使用量建議可以參考下表：

注意事項

1 混合溶液時請勿劇烈搖晃或震蕩，防止過多氧氣混入膠溶液，抑制凝膠的凝固。

2 制膠所需的用品應保持干凈，以避免污染，影響使用效果。

3 本說明書中所提供的促凝劑的使用量僅作為參考，實際用量可根據個人經驗和實際情況調整。加入較多量的促凝劑可加速凝膠速度，反之減慢 凝膠速度。

4 配膠時應避免上/下層膠混合溶液中同時加入促凝劑，防止下層膠混合溶液灌注時間過長，導致不能及時灌注上層膠混合溶液，從而影響最終所 制備的凝膠的質量。

5 配膠時應先將膠溶液和緩沖液混勻后再加入促凝劑。

6 上/下層膠混合溶液與促凝劑混勻之后，應在 2 min內灌注進玻璃板，并完成封閉或插入梳子操作。

7 在配膠前，將膠溶液及緩沖液平衡到室溫（室溫靜置十分鐘），可有效避免凝膠過程中產生氣泡。

8 推薦電泳條件為：140 V，約 60 min。

凝膠選擇

上圖為 Tris-Glycine緩沖系統中，蛋白分子量標準(Thermo：26616，10~180 kDa，含有 10條蛋白條帶)在不同濃度的 SDS-PAGE凝膠中 的分離示意圖。因溫度、pH值等因素不同，實際分離情況會略有出入，本圖僅供參考。

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