MC3T3-E1成骨誘導分化與檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

MC3T3-E1成骨誘導分化與檢測試劑盒是專為骨細胞研究設計的實驗工具，適用于體外誘導MC3T3-E1細胞向成骨細胞分化及檢測其分化進程。該試劑盒包含標準化誘導培養(yǎng)基、特異性染色試劑及定量檢測組分，可完整支持細胞形態(tài)學觀察、堿性磷酸酶活性檢測及鈣結節(jié)形成分析，為骨代謝研究提供可靠實驗方案。

MC3T3-E1成骨誘導分化完全培養(yǎng)基包括成骨誘導培養(yǎng)體系所有成分以及鑒定所用的茜素紅染色液，可用于 MC3T3-E1 成骨誘導分化與染色。

特點優(yōu)勢：

誘導分化程序簡單便捷

成骨誘導效率高

本產(chǎn)品已經(jīng)過無菌檢測、 pH 測試、滲透壓檢測、內(nèi)毒素檢測。

產(chǎn)品組成：

注意: MC3T3-E1成骨誘導分化完全培養(yǎng)基2-8℃保存，1個月有效，請盡快使用。

產(chǎn)品使用：

一：完全培養(yǎng)基的配制方法：

1. 配制前將特級胎牛血清及成骨誘導添加物放置于4℃冰箱內(nèi)完全融化。

注意: 融化后的血清中可能出現(xiàn)絮狀物，其主要成分為析出的血纖蛋白，這不會影響產(chǎn)品使用效果；如絮狀物較多，可離心去除（不建議過濾，過濾會造成部分營養(yǎng)物質(zhì)丟失）。

2. 用75%醫(yī)用酒精擦拭消毒試劑盒中各瓶/管表面。

3. 將血清和成骨誘導添加物全部加入DMEM低糖培養(yǎng)基中。

4. 輕輕顛倒搖晃配制好的成骨誘導分化完全培養(yǎng)基，使其混合均勻。

特別建議：如短時間內(nèi)無法使用完全部的培養(yǎng)基，建議按照上述配方比例分批配制；剩余成分可以分裝為合格規(guī)格，按各自保存條件儲存，切勿反復凍融。

二：明膠包被培養(yǎng)器皿表面：

1. 為了避免誘導過程中細胞漂浮，建議對成骨誘導使用的培養(yǎng)器皿表面進行明膠包被。

2. 取能覆蓋整個培養(yǎng)皿/板底面量的0.1%明膠入到培養(yǎng)皿/板中，如6孔板中加2mL/孔。

3. 搖勻液體使其覆蓋整個培養(yǎng)皿/板的底面。

4. 將鋪有0.1%明膠的培養(yǎng)皿/板室溫放置（生物安全柜或超凈工作臺中）至少30min以上。

5. 吸棄明膠，待培養(yǎng)皿/板晾干后，1×PBS洗2次，即可用于接種細胞。

注意: 包被明膠的培養(yǎng)皿/板在無菌和明膠不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周。

三：成骨誘導分化操作規(guī)程（以6孔板為例）：

1. 當細胞融合度達到80-90%時，消化細胞并計數(shù)；

2. 將細胞按照1×10⁵cells/mL的密度接種在包被0.1%明膠的六孔板中，每孔加入2mL正

常培養(yǎng)用完全培養(yǎng)基。

3. 將細胞置于37℃，5%CO₂的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

4. 當細胞匯合度達到60%-70%時，吸棄上清，PBS洗2次，每孔加入2mLMC3T3-E1成

骨誘導分化完全培養(yǎng)基；

5. 每3天全換液MC3T3-E1成骨誘導分化完全培養(yǎng)基（使用前需預熱至37℃）；

6. 誘導2-4周后，視細胞的形態(tài)變化及生長情況，用茜素紅染液進行染色。

注意：為防止成骨細胞脫落，建議成骨過程中出現(xiàn)大量鈣結節(jié)之后，換液形式變?yōu)槊績商煲淮伟肓繐Q液。

四：茜素紅染色（以6孔板為例）：

1. 誘導成骨分化結束后，吸棄上清，PBS清洗1-2遍，每孔加入2mL4%多聚甲醛溶液，

固定30min；

2. 將4%多聚甲醛吸凈，PBS清洗2遍。每孔中加入1mL茜素紅染液，染色5-10min；3.吸凈茜素紅染液，PBS清洗2-3遍。

3. 每孔加入1mLPBS，倒置顯微鏡下觀察成骨染色效果。

4. 顯微鏡下可觀察到成骨分化細胞形成大量染成紅色的鈣結節(jié)，呈現(xiàn)典型的成骨分化。

圖1                                                                             圖2

         圖1：MC3T3-E1成骨誘導10d染色效果（100X）

         圖2：MC3T3-E1成骨誘導10d染色效果（200X）

注意事項：

1.      本產(chǎn)品所有組分均為無菌包裝，在使用過程中請注意無菌操作，避免微生物污染；若配制過程有污染風險，可將完全培養(yǎng)基過濾除菌。

2.      本產(chǎn)品發(fā)貨時使用冰袋運輸，若收到貨后暫時不使用，請按照保存條件將各組分保存。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學研究，不得用于醫(yī)學診斷及其他用途！