雙丙氨膦

Bialaphos  

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Bialaphos，中文名雙丙氨膦，是由鏈霉菌Streptomyces hydroscopius或Streptomyces viridochromeogenes代謝產(chǎn)生的一種天然有機(jī)膦三肽抗生素，由兩個(gè)丙氨酸殘基和谷氨酸類似物草銨膦（phosphinothricin，也稱為glufosinate）組成。Bialaphos可以用于許多植物物種的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，篩選含有抗性基因（bar）的基因工程細(xì)胞系。Bialaphos在玉米培養(yǎng)中比草銨膦的活性強(qiáng)；在小麥培養(yǎng)中，雙丙氨膦是用來(lái)篩選含有bar基因植物最可靠的選擇標(biāo)準(zhǔn)。作為一種廣譜除草劑，Bialaphos還對(duì)革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌以及一些真菌類植物病原體具有抑菌作用。

Biolaphos的選擇機(jī)制在于：對(duì)于正常（無(wú)相關(guān)抗性）細(xì)胞，一旦進(jìn)入細(xì)胞后，雙丙氨膦被水解轉(zhuǎn)化為草銨膦（phosphinothricin），后者對(duì)植物細(xì)胞具有毒性。因其可抑制谷氨酰胺合成酶活性，引起細(xì)胞內(nèi)氨的積累，破壞細(xì)胞的初級(jí)代謝從而殺傷細(xì)胞。來(lái)自Streptomyces hygroscopicus的bar基因，以及來(lái)自Streptomyces viridochromeogenes的pat基因都能夠編碼草銨膦乙酰轉(zhuǎn)移酶（phosphinothricin acetyltransferase (pat) enzyme），后者通過(guò)乙酰化草銨膦從而解除該化合物的毒性，因此使細(xì)胞對(duì)雙丙氨磷以及草銨膦產(chǎn)生抗性。

產(chǎn)品特性：

1）CAS NO.：71048-99-2

2）英文別名：Bialaphos

3）中文名稱：雙丙氨膦

4）分子式：C11H21N3O6P·Na

5）分子量：345.26 g/mol

6）外觀：白或淺棕色結(jié)晶性粉末

7）純度：≥85%

8）溶解性：溶于水（10 mg/mL）

9）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃保存，有效期2年。母液-20℃分裝保存，有效期1年。

應(yīng)用案例【轉(zhuǎn)基因的小麥幼胚/愈傷組織篩選】（僅作參考）：

1. 使用草銨膦（PPT）或雙丙氨膦進(jìn)行轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選；

2. 粒子轟擊（bombardment）后將未成熟幼胚逐個(gè)轉(zhuǎn)移到E3培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)7-14天；

3. 胚胎轉(zhuǎn)移到含5μg/ml PPT（或雙丙氨膦）的MSCB5培養(yǎng)基（第一輪篩選用培養(yǎng)基），黑暗培養(yǎng)2周；于這2周內(nèi)不能正常生長(zhǎng)的愈傷組織直接扔棄。

4. 用解剖刀將在MSCB5培養(yǎng)基上增殖的細(xì)胞簇解離，亞克隆，轉(zhuǎn)移到含有10 μg/ml PPT（或雙丙氨膦）的MSCB10培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)4周。

5. 在含5μg/ml或10μg/ml PPT（或雙丙氨膦）的培養(yǎng)基上篩選過(guò)程的持續(xù)周期約為50-75天。將所有培養(yǎng)物放到植物生長(zhǎng)培養(yǎng)箱內(nèi)，設(shè)置25 °C，黑暗培養(yǎng)。每一個(gè)轉(zhuǎn)基因愈傷組織在含有篩選標(biāo)志的培養(yǎng)基上最終生長(zhǎng)為大量的胚性愈傷組織。

6. 設(shè)置1-10μg/ml PPT（或雙丙氨膦）的梯度濃度來(lái)測(cè)試未轉(zhuǎn)化愈傷組織，以建立更加有效的篩選系統(tǒng)。每一次實(shí)驗(yàn)大概準(zhǔn)備20個(gè)目標(biāo)培養(yǎng)平板。2個(gè)為對(duì)照，1個(gè)在N6C1上生長(zhǎng)以監(jiān)測(cè)培養(yǎng)物的健康情況，另1個(gè)在含5-10μg/ml雙丙氨膦的N6C1上生長(zhǎng)以驗(yàn)證未轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)選擇標(biāo)志的反應(yīng)。

【注意】：轉(zhuǎn)基因小麥愈傷組織的選擇實(shí)驗(yàn)中雙丙氨膦是有效的篩選標(biāo)志，然而雙丙氨膦不能殺死未轉(zhuǎn)化細(xì)胞。為了得到理想的篩選效果，建議低密度（大概每個(gè)平板上10個(gè)未成熟幼胚）亞培養(yǎng)粒子轟擊后的細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！