組織消化液（RUO）

Tissue Digestive Mix-I

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【預期用途】 

 用于從組織上消化原代干細胞，做后續細胞體外增殖培養。 

 【檢驗原理】 

 以特定酶自組織塊分離出原代間充質干細胞是常見的細胞培養技術。組織消化液利用數種重組表達的消化酶制備而成，無動物源成分。組織消化液針對組織的細胞外基質而設計, 不含胰酶，不會傷害細胞。可以有效地消化細胞外基質，進而從組織塊 (臍帶、 脂肪、胎盤) 分離出大量的原代間充質干細胞，作為后續細胞增殖使用。 

 【主要組成成分】 

 由 DMEM -LG 基礎培養基、膠原脢、分散酶、脫氧核糖核酸酶組成。 

 【適用范圍】 

 收獲組織 (臍帶、脂肪、胎盤)的原代間充質干細胞, 做后續細胞體外增殖培養。 

 【儲存條件及有效期】 

 應貯存在-20℃，有效期為1年。開封后存放 4℃，注意避光，1周內使用。不建議反復凍融。干冰運輸。 

 【生產日期與失效日期】 

 詳見產品標簽。 

 【使用方法】 

 以臍帶組織為例 

 1. 將臍帶用DPBS漂洗干凈，剪成1-2 cm大小， 剔除血管。 

 2. 將組織塊剪成3-5 mm³，移入50 ml離心管， 再加入適量的分離液。 

* 一條長度10公分的臍帶建議加入10 ml的分離液；或者組織塊 : 分離液（vol）= 1:1。 

** 視情況而定，可自行在分離液中添加1%青鏈雙抗。 

 3. 把 50 ml離心管橫放在37℃細胞培養箱，過夜反應（16小時）。 

* 若總反應體積較大，也可持續旋轉混合。 

 4. 加入和分離液等體積的 0.05%EDTA 終止反應 后，1500 xg離心5分鐘，去除上清。 

* 溶液比較濃稠，小心不要影響下層的細胞; 建議留下5ml左右的溶液。 

** 沒有EDTA, 可使用無鈣鎂DPBS取代。 

 5. 以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細胞后， 300 xg離心5分鐘，去除上清。 

 6. 再次以和分離液等體積的無鈣鎂 DPBS 重懸細胞后，250 xg離心5分鐘，去除上清。 

 7. 用適量的培養基重懸細胞后，即可按常規細胞培養方法接種P0代細胞培養。 

* 消化后的原代細胞，建議培養時接種密度提高到 10,000/cm² 以上；傳代后即可按常規的接種密度培養 。 

以皮下脂肪組織塊為例 

 1. 以 DPBS 將新鮮的皮下脂肪組織塊漂洗干凈，剔除明顯的血管或血塊。 

 2. 將組織塊剪成3-5 mm³，移入50 ml離心管，再加入適量的分離液。 

* 1 克組織塊可加入約5 ml分離液。 

** 視情況而定，可自行在分離液中添加 1%青鏈雙抗。 

 3. 把 50 ml離心管橫放在37℃細胞培養箱，反應4 小時 (用戶也可自行調整反應時間)。 

* 若總反應體積較大，也可使用持續旋轉混合。 

 4. 加入和分離液等體積的0.05%EDTA 終止反應后，300 xg離心5分鐘，去除上清。 

* 沒有EDTA, 也可使用無鈣鎂DPBS取代。 

 5. 以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細胞后，250 xg離心5分鐘，去除上清。 

 6. 再次以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細胞后，250 xg離心5分鐘，去除上清。 

 7. 用適量的培養基重懸細胞，再以100目的篩網過濾細胞液后，即可按常規細胞培養方法接種細胞培養。 

* 消化后的原代細胞，建議培養時接種密度提高到 10,000/cm²以上；傳代后即可按常規的接種密度培養。 

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 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療