磁珠法總RNA提取試劑盒（單條孔）

產(chǎn)品介紹 

磁珠法總RNA提取試劑盒，為客戶提供一套從動(dòng)物組織、植物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌中純化完整、高質(zhì)量總RNA。試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)， 快速裂解細(xì)胞，沉淀蛋白，再經(jīng)過(guò)醇介導(dǎo)將核酸分子結(jié)合于納米磁珠表面，再經(jīng)DNA酶I處理去除基因組DNA，最終得到純度高，完整性好的總 RNA。可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern雜交等多種下游實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng) 

1 使用前檢查各組分是否出現(xiàn)沉淀。若有，請(qǐng)輕輕搖晃混合均勻，或37℃水浴重新溶解。

2 β-巰基乙醇請(qǐng)4℃保存，使用前在RNA裂解液中加入400μl的β-巰基乙醇至終濃度為4%，加入β-巰基乙醇的RNA裂解液于4℃保存，有效期 6個(gè)月。 

3 戴一次性干凈手套和口罩操作，防止皮膚、唾液和實(shí)驗(yàn)室用品上存在的RNase污染。 

4 使用無(wú)菌無(wú)RNase的塑料制品和槍頭。 

5 若使用玻璃器皿須經(jīng)過(guò)0.1% DEPC水在37℃下浸泡12小時(shí)，然后經(jīng)過(guò) 121℃高壓滅菌30分鐘，烘干后使用。

6 配制相關(guān)的試劑必須使用經(jīng)過(guò)121℃高壓滅菌的0.1% DEPC水。

使用流程

樣本預(yù)處理 

1 組織樣品 取10-20mg動(dòng)物組織，置于液氮中快速研磨成粉末，立即加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），也可將組織置于離心管中，迅速加入 200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用普通玻璃勻漿器或者電動(dòng)勻漿器將組織徹底研磨均勻。

2 細(xì)胞樣品 收集2-5×106個(gè)細(xì)胞。 對(duì)于貼壁細(xì)胞，吸棄培養(yǎng)液，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇）。用移液器反復(fù)吹打混勻直至細(xì)胞團(tuán)消化不見(jiàn)為止，轉(zhuǎn)移到干凈的 離心管內(nèi)。 對(duì)于懸浮細(xì)胞：5000rpm（~3056×g）離心5min，吸棄培養(yǎng)液，收集細(xì)胞，每2-5×106個(gè)細(xì)胞加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇）。 用槍頭反復(fù)吹打混勻直至看不到細(xì)胞團(tuán)為止。

3 植物組織樣品 將液氮研磨好的粉末立即轉(zhuǎn)移到RNA裂解液中，按照每10-20mg加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用移液器吹打均勻至無(wú)明顯的粉末團(tuán)。

4 細(xì)菌樣品 用100μl新鮮配制的含溶菌酶的TE緩沖液重懸細(xì)菌沉淀。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌可使用3mg/ml(終濃度)的溶菌酶，輕輕混勻，室溫孵育 5-10min，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用槍頭吹打混勻；革蘭氏陰性細(xì)菌則采用0.4mg/ml(終濃度)的溶菌酶，輕輕敲打 混勻，室溫孵育3-5min。加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用槍頭吹打混勻。

自動(dòng)化法提取 -MagET? Smart 8

1 向3.1處理好的樣品勻漿液中加入400μl RNA中和液，混勻。室溫放置3-5min。如果動(dòng)物組織樣品來(lái)源比較珍貴，可以選擇裂解物加入 RNA中和液后，置于70℃加熱5min，提高RNA得率。 

2 室溫，12,000rpm（~13,400×g）離心1min，小心吸取上清液備用。

3 按如下比例配制DNase I反應(yīng)混合液，并輕輕混勻。

4 取出MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑條 ，顛倒混勻數(shù)次使磁珠重懸，輕甩MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑條使試劑及磁珠集中到試劑條底部。 

注：使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑條劇烈振動(dòng)，防止液體濺出。

5 將50μl的 DNase I反應(yīng)混合液加入到MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑條的第3孔內(nèi)。

6 在MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑條的第2孔中加入步驟2的全部上清液，將MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑條置于MagET? Smart 8 的試劑盒支架上。

7 用移液器準(zhǔn)確吸取100μl無(wú)核酸酶水，加入到MagET? 洗脫管中，將MagET? 洗脫管安裝于MagET? Smart 8 的試劑盒支架上，將試劑盒支架安裝于MagET? Smart 8 設(shè)備底座上。

注：請(qǐng)?jiān)诩訕雍? h內(nèi)上機(jī)運(yùn)行程序。

8 將MagET? 4孔磁棒套插入MagET? Smart 8 的磁棒套架卡槽內(nèi)。

9 選擇程序并運(yùn)行，自動(dòng)化程序結(jié)束后，取下MagET? 4孔磁棒套丟棄，拿出試劑盒支架，取下MagET? 洗脫管，蓋上管蓋，即得總RNA產(chǎn)物。如不能及時(shí)進(jìn)行下游試驗(yàn)，RNA樣本可短期保存于-80℃。

表1. MagET? Smart 8 程序設(shè)定