Exonuclease I 核酸外切酶 I 

產品簡介：

Exonuclease l (E.coli) 是單鏈特異性核酸外切酶，沿 3'-5' 方向降解單鏈 DNA，釋放 5'-脫氧核糖核苷酸。Exo I 對單鏈有很強的特異性，不會降解雙鏈 DNA 和 RNA。此外，也無法降解由磷酰基團或乙?；鶊F封閉了 3'-OH 末端的 DNA 單鏈。本產品是把 Exo I 基因 (E.coli) 在大腸桿菌中進行重組表達后，經多次純化分離而得到的。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

產品應用：

1. 從 PCR產物中去除引物和寡核苷酸：Exo I可去除PCR反應中 未用完的引物以及擴增產生的多余的單鏈DNA。

2. 去除核酸混合物中的ssDNA：Exo I可特異性地消化反應液中的 ssDNA，而不會消化dsDNA和RNA。 3. ssDNA 檢測：Exo I可用于檢測存在游離3'羥基的ssDNA。

活性定義:

1 活性單位(U)是指以單鏈DNA為底物 ，37℃、1× Exo I緩沖液 條件下，30 min內釋放10 nmol酸溶性核苷酸所需的酶量。

蛋白純度檢測:

經SDS-PAGE凝膠電泳檢測，蛋白純度不低于95%。

非特異性內切酶活性：

37℃下，在20 μl反應體系中將100 U Exonuclease I 與 200 ng 超螺旋質粒DNA共同溫育4 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于 20%的質粒DNA轉變成缺刻或線性狀態。

DNase 活性：

37℃下，在20 μl反應體系中將100 U Exonuclease I與 15 ng 雙鏈DNA片段共同溫育16 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，雙鏈DNA 片段無變化。

RNase活性：

37℃下，在10 μl反應體系中將100 U Exonuclease I與 500 ng RNA共同溫育1 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，超過90%的RNA保持完整。

宿主DNA殘留：

采用中國藥典 2020 版四部通則 3407 外源性 DNA 殘留量測定法第三法定量PCR 法，本品中大腸桿菌宿主細胞DNA 殘留量低于1 拷貝/20 U。

使用方法：

1. 推薦的反應體系：

（1）PCR反應產物中去除引物或其他單鏈殘留：

注：配合蝦堿性磷酸酶（SAP）用來去除殘存的單核苷酸（dNTPs），之后不需要對 PCR 產物進行純化，即可以進行測序反應。

（2）單鏈DNA去除

a：DNA mixture 中的單鏈DNA不超過1μg。

2. 推薦的反應條件：

37℃溫育15~30 min。

3. 失活：

80℃溫育20 min。

注意事項：

1.      Exo I 可兼容絕大多數PCR體系，可直接在PCR產物中添加。 純化后的PCR產物可直接用于測序，但不推薦直接用于克隆。

2.      Exo I 用于單獨去除ssDNA的實驗，推薦搭配10× Exo I Buffer 使用。

3.      Exo I 不能切割雙鏈DNA，因此含有二級結構的單鏈DNA需要變性后才能完全消化。

4.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。