T5 Exonuclease T5核酸外切酶 

產(chǎn)品簡介：

T5 Exonuclease 是一種核酸外切酶，沿5→3'方向從雙鏈或單鏈 DNA 的 5' 末端消化 DNA，同時也可從線性或環(huán)狀雙鏈 DNA 的缺刻或缺口處對 DNA 進(jìn)行消化。但 T5 Exonuclease 無法消化超螺旋DNA，此外，當(dāng)溶液中的 Mg2?濃度低于1 mM 時，T5 Exonuclease對單鏈 DNA 的消化活性也會受到抑制。因此，T5 Exonuclease 尤其適用于從質(zhì)粒中降解線性化與缺刻質(zhì)粒、去除連接產(chǎn)物中的非環(huán)狀DNA、無縫克隆(Gibson Assembly)等。

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

產(chǎn)品應(yīng)用：

1. 降解線性單鏈、雙鏈DNA或缺刻質(zhì)粒DNA。

2. 去除環(huán)化雙鏈DNA中的不完全連接產(chǎn)物。

3. 去除堿裂法提取質(zhì)粒過程中產(chǎn)生的變性質(zhì)粒DNA，降解線性和缺刻質(zhì)粒DNA，獲得高純度的超螺旋質(zhì)粒DNA。

4. 提高小提質(zhì)粒cDNA文庫的轉(zhuǎn)染效率。

5. 常用于Gibson組裝(Gibson Assembly)。

活性定義:

1 活性單位(U)是指以單鏈DNA為底物 ，37℃、1× Exo I緩沖液 條件下，30 min內(nèi)釋放10 nmol酸溶性核苷酸所需的酶量。

蛋白純度檢測:

經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳檢測，蛋白純度不低于95%。

內(nèi)切酶殘留檢測：

將 10 U T5 Exonuclease 與 1 μg 超螺旋質(zhì)粒 DNA 在 37℃下，共同溫育 4 h 后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于10% 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)變成缺刻狀態(tài)。

宿主DNA殘留檢測：

使用大腸桿菌16S rDNA 特異性引物，采用熒光定量PCR法檢10 U T5 Exonuclease，大腸桿菌宿主基因組DNA 殘留低于1 copy。

加樣體系：

反應(yīng)條件：

37℃ 30 min。

失活條件：

80℃ 20 min，或加入EDTA至終濃度為至少11 mM，或 加入含SDS的DNA Loading（SDS終濃度需0.08%）。

注意事項：

1.      T5 Exonuclease 是一種非特異性的DNA外切酶，對于不同類別的 DNA有不同的反應(yīng)速率，進(jìn)行反應(yīng)時應(yīng)該注意選取合適的酶量和反應(yīng)時間。

2.      T5 Exonuclease 在37℃擁有最佳反應(yīng)活性，在50℃也具有一定活性，可用于Gibson組裝。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！