<NBS5182> Picogreen dsDNA Quantitation Reagent Picogreen雙鏈DNA定量試劑

欄目：NoninBio

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Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料，常用于雙鏈DNA的定量檢測。Picogreen dsDNA定量檢測：Picogreen僅在與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。

Picogreen雙鏈DNA定量試劑

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝規(guī)格	價格
NBS5182-100ul	Picogreen dsDNA Quantitation Reagent Picogreen雙鏈DNA定量試劑	100ul	600
NBS5182-500ul		5×100ul	1850
NBS5182-1ml		10×100ul	2975

產(chǎn)品簡介：

Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料，常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構(gòu)建，DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物的估測等領(lǐng)域中具有重要意義，疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關(guān)系到人類的健康。

Picogreen dsDNA定量檢測：Picogreen僅在與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在三個數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以精確地測量多個來源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物。

相比傳統(tǒng)的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：①靈敏度高：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省寶貴的樣品；②特異性強：在等摩爾的RNA存在的條件下，對dsDNA具有特異性；③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應混合物中純化DNA。④易于使用——只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和熒光計兼容。⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

我司可根據(jù)用戶需求提供多種規(guī)格的Picogreen雙鏈DNA定量試劑（Picogreen dsDNA Quantitation Reagent），本品以溶于DMSO的母液形式提供，濃度為～1mg/ml。也有提供成套試劑盒（CAS#NBS5183），試劑盒內(nèi)若按照2ml反應體系來計算（比色皿），10×100 μL規(guī)格可做100次反應；若按照200μl反應體系來計算（96孔板），10×100 μL規(guī)格可做1000次反應；單次反應體系取決于熒光檢測儀器。

產(chǎn)品組成：

名稱	編號	規(guī)格
Picogreen dsDNA Quantitation Reagent （200× in DMSO）	NBS5182-100ul	100ul
Picogreen dsDNA Quantitation Reagent （200× in DMSO）	NBS5182-500ul	5x100ul
使用說明書	1份

保存條件:

-20℃避光密封保存，有效期2年。

產(chǎn)品使用：

一、PicoGreen (2×)工作液配制

使用前將PicoGreen dsDNA 定量試劑回溫至室溫；PicoGreen是以100μL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中。實驗當天，根據(jù)實驗需求用1×TE按1:100 的比例稀釋適量母液到PicoGreen (2×)。

例如：要準備足夠的操作溶液以2ml檢測體系測定20個樣品，可向19.8mL1×TE 中加入200μL PicoGreen dsDNA 定量試劑 (200×)。

【注意】：a）由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。b）PicoGreen見光易降解，所以應將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。c）溶液最好在配制好數(shù)小時內(nèi)使用，以保證最佳結(jié)果。d）Picogreen的最終工作濃度建議為1×；用戶也可根據(jù)實際情況調(diào)整此濃度，比如：最終工作濃度調(diào)低到0.5×。

二、檢測步驟

2.1 Lambda DNA standard (200ng/ml)的配制

用1×TE對λ DNA standard (10μg/ml)進行50倍稀釋。比如，向10μl λ DNA standard (10μg/ml)加入490μl 1×TE混勻，此時標準品濃度為200ng/ml；

2.2 標準曲線的制備

【注意】：根據(jù)2010年《中國藥典》所提，PicoGreen定量DNA的方法檢出限~0.3ng/ml。DNA含量在1.25-80ng/ml范圍內(nèi)線性較好（R2＞0.99），因此，在此范圍內(nèi)設(shè)置濃度梯度，建議標準曲線較好。

l 比色皿體系檢測（2ml）

a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和λ DNA standard（200ng/ml），通過梯度稀釋獲得相應濃度的標準溶液，隨后加入1ml PicoGreen (2×)定量試劑，混勻后，于室溫避光孵育2-5min，并以1×TE緩沖液為blank。【注意】：確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測皿的外部，可以驅(qū)散氣泡。

表1 比色皿體系所需加入各組分量及標準品終濃度表

TE體積(μL)	λ DNA standard (μl)	PicoGreen (2×) (μl)	λ DNA standard終濃度
0	1000（200ng/ml）	1000	100ng/ml
200	800（200ng/ml）	1000	80ng/ml
400	600（200ng/ml）	1000	60ng/ml
600	400（200ng/ml）	1000	40ng/ml
800	200（200ng/ml）	1000	20ng/ml
900	100（200ng/ml）	1000	10ng/ml
950	50（200ng/ml）	1000	5ng/ml
1000	0（200ng/ml）	1000	0ng/ml (blank)

b、于熒光儀中檢測各濃度熒光值，Ex/Em=~480nm/520nm。

【注意】：為了確保熒光讀數(shù)在熒光儀的檢測范圍內(nèi)，應調(diào)節(jié)增益使含最高DNA濃度的樣品熒光值接近熒光儀的最大值；為了減少光漂白，應保持所有樣品的檢測時間一致。

c、各濃度標準溶液得到的熒光值減去空白對照熒光值，之后對DNA濃度和熒光值做標準曲線。

d、測量待檢樣本的熒光值。根據(jù)熒光值和所建立的標準曲線，來確定樣本DNA的濃度。

l 微孔板體系檢測（200μl）

a、按照表2 向96孔板中加入TE和λ DNA standard（200ng/ml），通過梯度稀釋獲得相應濃度的標準溶液，隨后加入100μl PicoGreen (2×)定量試劑，混勻后，于室溫避光孵育2-5min，并以1×TE緩沖液為blank。【注意】：確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微孔板的外部，可以驅(qū)散氣泡。

表2 酶標板體系所需加入各組分量及標準品終濃度表

TE體積(μL)	λ DNA standard (μl)	PicoGreen (2×) (μl)	λ DNA standard終濃度
0	100（200ng/ml）	100	100ng/ml
20	80（200ng/ml）	100	80ng/ml
40	60（200ng/ml）	100	60ng/ml
60	40（200ng/ml）	100	40ng/ml
80	20（200ng/ml）	100	20ng/ml
90	10（200ng/ml）	100	10ng/ml
95	5（200ng/ml）	100	5ng/ml
100	0（200ng/ml）	100	0ng/ml (blank)