快速支原體檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

快速支原體檢測(cè)試劑盒主要用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品（如血清）中是否含有支原體污染，該試劑盒僅用于基礎(chǔ)科研。

本試劑盒可以檢測(cè)：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3） M.Arginini、（4） M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）AcholeplasmaLaidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細(xì)胞的支原體（注：M.為Mycoplasma的縮寫）。

以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上，本試劑盒產(chǎn)品全部可以檢測(cè)。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種。注意：本試劑盒無(wú)法檢測(cè)UreaplasmaUrealy-ticum支原體！該支原體在支原體污染種極其罕見。

保存條件: 

-20℃保存，1年有效。

產(chǎn)品組成：

與PCR法檢測(cè)支原體比較，本試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)顯著：

產(chǎn)品使用：

一、 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備

為了準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否有支原體的污染，待測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)液樣品最好來(lái)源于至少培養(yǎng)三天且匯合度在 70%~90% 左右的細(xì)胞培養(yǎng)上清（貼壁細(xì)胞），無(wú)需離心。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也需要在換液傳代后，至少讓細(xì)胞生長(zhǎng)3天再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)，也無(wú)需離心。哺乳動(dòng)物細(xì)胞的存在不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

注：收集的待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測(cè)，請(qǐng)放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個(gè)月，在-80℃可以長(zhǎng)期保存。此外，為了節(jié)約檢測(cè)成本，可以將不同時(shí)間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存，而后一起檢測(cè)。

二、 反應(yīng)體系的配制

表1 恒溫反應(yīng)體系的配制

1.      溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出，待其融化后（可在37℃水浴內(nèi)放置5~10 min以幫助融化），從-20℃冰箱中取出溶液Ⅱ置于冰上。吹吸均勻后，按表1比例，混合溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ。如有多個(gè)樣品，為了防止移液誤差，建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數(shù)1.06，保證每個(gè)反應(yīng)管中的反應(yīng)液足量。從配液開始的所有步驟，均在冰上操作。

舉例：如果待測(cè)樣品為3個(gè)（加上1個(gè)陰性和1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照），則樣品總數(shù)為5個(gè)。溶液Ⅰ的總體積為 21.5×5×1.06=113.95 μL，溶 液 Ⅱ 的總體積為1×5×1.06=5.3 μL，溶液Ⅲ的總體積為0.5×5×1.06= 2.65 μL，將溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ混合均勻。

注：溶液Ⅱ必須一直在-20℃冰箱中保存并在操作時(shí)置于冰上。溶液Ⅱ即使在-20℃條件下仍為液態(tài)，不需置于室溫。

2.      將上述配制好的反應(yīng)體系吹打均勻后按每管 23 μL 分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應(yīng)液體積一樣。PCR管應(yīng)該使用透明度良好的薄壁PCR管。

3.      往測(cè)試管（Test）中加入2 μL待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液；往陽(yáng)性對(duì)照管（Positive）中加入2 μL 陽(yáng)性支原體DNA； 往陰性對(duì)照管（Negative）中加入2 μL滅菌水；反應(yīng)總體積為25 μL。 注1：裝有陽(yáng)性支原體DNA的螺口管開蓋之前，需要短暫離心。

注2：進(jìn)行反應(yīng)體系配制的房間，與進(jìn)行樣品前處理、加陽(yáng)性對(duì)照DNA、樣品DNA的房間最好分開。

三、 反應(yīng)

PCR儀設(shè)置程序：61℃，60 min；10℃, forever；熱蓋溫度，100℃。

注：若實(shí)驗(yàn)室反應(yīng)場(chǎng)所沒有PCR儀，可用水浴鍋代替，水浴鍋顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差不超過0.5℃，另須往每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)加入25 μL礦物油，以防止水份揮發(fā)，然后蓋上蓋子，將反應(yīng)管插入帶孔的漂板內(nèi)，放入已經(jīng)升溫到61℃ 的水浴內(nèi)，準(zhǔn)確反應(yīng)60 min。

四、 結(jié)果判斷

61℃反應(yīng)60 min后，立刻取出反應(yīng)管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應(yīng)管溶液顏色的變化， 即可判斷檢測(cè)結(jié)果。如果溶液為藍(lán)綠色，則說(shuō)明有支原體污染；如果為紫紅色，則說(shuō)明沒有支原體污染。

注：在 61℃反應(yīng)的時(shí)間必須準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，最多不得超過5 min，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。必須在反應(yīng)后2 h內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判斷，避免室溫下擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行，影響結(jié)果判別。

Negative reaction                      Positive reaction

注意事項(xiàng)：

1.      必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購(gòu)移液器、新開封的槍頭操作；整個(gè)操作過程，佩戴口罩，不要開口說(shuō)話。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽(yáng)性。

2.      最好使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽(yáng)性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭，至少應(yīng)該使用新開封的吸頭。

3.      檢測(cè)過程中，用過的各類吸頭、離心管務(wù)必小心處理，應(yīng)裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶?jī)?nèi)。反應(yīng)后的PCR管，不要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔到遠(yuǎn)離細(xì)胞房的獨(dú)立垃圾桶內(nèi)。

4.      如果細(xì)胞被支原體污染，可以選購(gòu)支原體去除試劑（貨號(hào)：NW3207）盡早去除。

5.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！