快速支原體檢測試劑盒

產品簡介：

快速支原體檢測試劑盒主要用于檢測細胞培養上清或別的液體樣品（如血清）中是否含有支原體污染，該試劑盒僅用于基礎科研。

本試劑盒可以檢測：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3） M.Arginini、（4） M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）AcholeplasmaLaidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細胞的支原體（注：M.為Mycoplasma的縮寫）。

以上13種支原體約占細胞支原體污染的99%以上，本試劑盒產品全部可以檢測。絕大多數支原體污染集中于前8種。注意：本試劑盒無法檢測UreaplasmaUrealy-ticum支原體！該支原體在支原體污染種極其罕見。

保存條件: 

-20℃保存，1年有效。

產品組成：

與PCR法檢測支原體比較，本試劑盒產品優勢顯著：

產品使用：

一、 待測樣品的準備

為了準確判斷細胞是否有支原體的污染，待測的細胞培養液樣品最好來源于至少培養三天且匯合度在 70%~90% 左右的細胞培養上清（貼壁細胞），無需離心。懸浮培養的細胞也需要在換液傳代后，至少讓細胞生長3天再取培養液進行檢測，也無需離心。哺乳動物細胞的存在不會影響檢測結果。

注：收集的待測細胞培養液樣品如果不立即檢測，請放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個月，在-80℃可以長期保存。此外，為了節約檢測成本，可以將不同時間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存，而后一起檢測。

二、 反應體系的配制

表1 恒溫反應體系的配制

1.      溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出，待其融化后（可在37℃水浴內放置5~10 min以幫助融化），從-20℃冰箱中取出溶液Ⅱ置于冰上。吹吸均勻后，按表1比例，混合溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ。如有多個樣品，為了防止移液誤差，建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數1.06，保證每個反應管中的反應液足量。從配液開始的所有步驟，均在冰上操作。

舉例：如果待測樣品為3個（加上1個陰性和1個陽性對照），則樣品總數為5個。溶液Ⅰ的總體積為 21.5×5×1.06=113.95 μL，溶 液 Ⅱ 的總體積為1×5×1.06=5.3 μL，溶液Ⅲ的總體積為0.5×5×1.06= 2.65 μL，將溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ混合均勻。

注：溶液Ⅱ必須一直在-20℃冰箱中保存并在操作時置于冰上。溶液Ⅱ即使在-20℃條件下仍為液態，不需置于室溫。

2.      將上述配制好的反應體系吹打均勻后按每管 23 μL 分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應液體積一樣。PCR管應該使用透明度良好的薄壁PCR管。

3.      往測試管（Test）中加入2 μL待測細胞培養液；往陽性對照管（Positive）中加入2 μL 陽性支原體DNA； 往陰性對照管（Negative）中加入2 μL滅菌水；反應總體積為25 μL。 注1：裝有陽性支原體DNA的螺口管開蓋之前，需要短暫離心。

注2：進行反應體系配制的房間，與進行樣品前處理、加陽性對照DNA、樣品DNA的房間最好分開。

三、 反應

PCR儀設置程序：61℃，60 min；10℃, forever；熱蓋溫度，100℃。

注：若實驗室反應場所沒有PCR儀，可用水浴鍋代替，水浴鍋顯示溫度與實際溫度的溫差不超過0.5℃，另須往每個反應管內加入25 μL礦物油，以防止水份揮發，然后蓋上蓋子，將反應管插入帶孔的漂板內，放入已經升溫到61℃ 的水浴內，準確反應60 min。

四、 結果判斷

61℃反應60 min后，立刻取出反應管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應管溶液顏色的變化， 即可判斷檢測結果。如果溶液為藍綠色，則說明有支原體污染；如果為紫紅色，則說明沒有支原體污染。

注：在 61℃反應的時間必須準確計時，最多不得超過5 min，以免出現假陽性。必須在反應后2 h內進行結果判斷，避免室溫下擴增反應進行，影響結果判別。

Negative reaction                      Positive reaction

注意事項：

1.      必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購移液器、新開封的槍頭操作；整個操作過程，佩戴口罩，不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽性。

2.      最好使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭，至少應該使用新開封的吸頭。

3.      檢測過程中，用過的各類吸頭、離心管務必小心處理，應裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶內。反應后的PCR管，不要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔到遠離細胞房的獨立垃圾桶內。

4.      如果細胞被支原體污染，可以選購支原體去除試劑（貨號：NW3207）盡早去除。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！