DiA (4-Di-16-ASP) 細(xì)胞膜熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的細(xì)胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產(chǎn)品專題 。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DiA為親脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞膜（比DiO擴(kuò)散速度快），常用于神經(jīng)元的示蹤。最顯著的特點(diǎn)就是能與DiI（DiIC18(3)）聯(lián)合使用進(jìn)行雙色標(biāo)記。DiA能用于甲醛固定組織染色，研究發(fā)現(xiàn)某些情況下當(dāng)DiO不能標(biāo)記固定組織時(shí)，DiA可得到良好標(biāo)記。DiA水溶液中的熒光非常弱，但與磷脂雙層膜結(jié)合后，光譜遷移熒光明顯加強(qiáng)。因其發(fā)射光譜非常廣，可被綠色，橙色，甚至是紅色濾片檢測(cè)到。

本品以DiA的碘鹽形式提供，英文名：4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide，純度≥90%，適用于熒光檢測(cè)研究。

基本特性：

1） 同義名：4-Di-16-ASP;4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide;

2） 分子式：C46H79IN2

3） 分子量：787.04g/mol

4） 外觀：紅色或橙色固體

5） 純度：≥90%

6） Ex/Em：491/613nm（甲醇）

7） 溶解性：溶于乙醇，DMSO，甲醇

8） 推薦濾光器：Omega-XF21, Chroma-31024

9）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，有效期一年。

產(chǎn)品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)條件做出調(diào)整。

1. 染色液制備

1）儲(chǔ)存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲(chǔ)存液。例如，取25mg DiA（Mw：787.04g/mol）溶于6.35ml無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲(chǔ)存液。【注意】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，調(diào)整到1～5 μM的工作濃度。【注意】工作液最終濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色

1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5）再重復(fù)3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細(xì)胞染色

1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內(nèi)。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

4）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。 

4、顯微鏡檢測(cè)

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見下表：

*：濾光片編號(hào)是熒光顯微鏡檢測(cè)的建議寬帶濾片設(shè)置。

*：DiR的熒光發(fā)射肉眼不可見，必須通過(guò)CCD攝像頭或其他近紅外敏感檢測(cè)器檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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