(5-FOA) 5-氟乳清酸

5-Fluoroorotic Acid 

產(chǎn)品簡介：

5-氟乳清酸（5-Fluoroorotic Acid，5-FOA）用于酵母負選擇是一種常用的分子遺傳篩選方法。酵母菌質(zhì)粒清除、質(zhì)粒穿梭、等位置換和雙雜交篩選都會用到5-FOA。5-FOA自身對酵母細胞無毒，但功能型URA3基因能編碼表達乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶），將其轉(zhuǎn)化為有毒形式（如5-氟尿嘧啶），從而使得酵母細胞無法生長。因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培養(yǎng)基中，攜帶URA3突變基因的酵母菌能正常生長。5-FOA主要用于釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae（URA3）的鑒定和篩選，雖然曾用于其他菌株，包括粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe（URA4 and URA5），白色念珠菌Candida albicans（URA3）和大腸桿菌E. coli（pyrF）。酵母雙雜交系統(tǒng)中5-FOA的使用允許構(gòu)建激活結(jié)構(gòu)域雜交文庫來鑒定蛋白-蛋白相互作用。

產(chǎn)品特性：

1）CAS NO：703-95-7

2）同義名：5-fluoro-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid; 5-Fluorouracil-4-carboxylic acid; 5-Fluoro orotic acid; 2,6-Dihydroxy-5-fluoropyrimidine-4-carboxylic acid;

3）分子式：C5H3FN2O4

4）分子量：174.10 g/mol

5）純度：>99%

6）外觀：類白色至淡黃色粉末

7）熔點：~258°C（高溫非常穩(wěn)定，如煮沸和高壓滅菌）

8）溶解性：溶于DMSO，微溶于水，乙醇，甲醇

9）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃干燥保存，2年有效。

產(chǎn)品使用：

一、5-FOA培養(yǎng)基配置方法（以粉末形式）

1.1 配制400ml標(biāo)準(zhǔn)的酵母合成培養(yǎng)基，并加入1g 5-FOA粉末，充分溶解混勻，0.22μm濾膜過濾除菌。【或者可當(dāng)高壓滅菌的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基冷卻到55oC后再加入1g 5-FOA粉末，然后過濾除菌。】

1.2 高壓滅菌瓊脂粉/水混合液（濃度為20g/600ml），使其冷卻到55oC。

1.3 將溫?zé)岬?-FOA培養(yǎng)液倒入瓊脂粉/水溶液內(nèi)，攪勻后，倒平板。

二、5-FOA培養(yǎng)基配置方法（以儲存液形式）

2.1 取100mg 5-FOA凍干粉，用1ml無水DMSO充分溶解，配制成100mg/ml（100×）的儲存液。短期頻繁使用，置于4oC避光保存；長期保存，根據(jù)單次用量分裝凍存，-20oC保存6個月有效。

2.2 根據(jù)實驗室認(rèn)可的方法，配制標(biāo)準(zhǔn)的酵母合成培養(yǎng)基（含瓊脂粉），高壓滅菌。放入轉(zhuǎn)子一起滅菌以便后續(xù)攪勻組分用。

2.3 冷卻到55oC后加入任何熱敏感組分（氨基酸，糖類或者其他成分）。

2.4 每升培養(yǎng)基加10ml 100× 5-FOA儲存液，混勻后，倒平板。

注意事項：

1.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題（FAQs）：

一. 如何保存5-FOA？

5-FOA粉末可置于4°C短期保存，-20°C長期保存。根據(jù)產(chǎn)品特性溶解配置儲存液，需避光置于4°C短期保存。小量分裝后-20°C長期保存，可穩(wěn)定保存6個月。

二. 5-FOA選擇性培養(yǎng)基pH是多少？

大于pH 4.5條件下5-FOA選擇性被破壞，唯一的問題在于質(zhì)子化形式的FOA會滲透進入細胞。一般情況標(biāo)準(zhǔn)配方配置的平板pH=2.8。在pH=6或6.2時5-FOA完全無活性，pH =5.4時5-FOA活性很好，pH=4或更低時5-FOA活性達到100%。正常情況配置5-FOA培養(yǎng)基不用調(diào)pH。

三. 預(yù)制的5-FOA選擇性平板能保存多久？

絕大多數(shù)實驗室保存5-FOA預(yù)制平板數(shù)月（3-6個月）。有的實驗室數(shù)據(jù)顯示能放9個月和＞12個月（4°C存放），圈上封口膜防止干燥。

四. 5-FOA使用濃度？

FOA（1mg/ml）在酵母分子遺傳學(xué)中常用作選擇性試劑；在Ura+細胞群體重篩選出Ura-細胞；篩選釀酒酵母菌乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶）突變株。FOA（0.1mg/ml）用來正篩選尿嘧啶營養(yǎng)缺陷型的硫依賴型嗜熱古細菌（Sulfolobus acidocaldarius）。

相關(guān)產(chǎn)品：