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全細胞內參抗體

Anti GAPDH Antibody-HRP

產品介紹 

GAPDH的分子量為146 kDa，由4個30-40 kDa的亞基組成。該酶是糖酵解反應中的一個關鍵酶，其主要功能是催化3-磷酸甘油醛氧化 （脫氫）和磷酸化，生成1,3-二磷酸甘油酸。由于GAPDH廣泛分布于各種組織中，幾乎在所有組織中都高水平表達，且表達量相對恒定， 不受外部誘導物的影響，故被廣泛應用于qPCR、WB等實驗的標準化內參。Anti GAPDH Antibody-HRP是通過一定的工藝將辣根過氧化 物酶 (HRP) 偶聯至GAPDH抗體上，進行WB實驗時加入發光液A和B，一般是魯米諾和過氧化氫，在辣根過氧化物酶 (HRP) 的催化 作用下，魯米諾與過氧化氫反應生成一種過氧化物，過氧化物不穩定隨即分解，形成一種能發光的電子激發中間體，當后者由激發態返回 至基態，就會產生熒光，實現對GAPDH內參蛋白的檢測。 

基本信息 

抗體來源：重組抗體 

交叉反應：人、大鼠、小鼠、植物、酵母等 

克隆類型：單克隆抗體 

偶聯物：辣根過氧化物酶 (HRP) 

純化方式：rProteinA親和純化 

儲存緩沖液：1×PBS (pH7.4)，0.05% proclin 300，50% 甘油 

儲存條件

干冰運輸，-20℃可保存2年，避免反復凍融

產品應用 

WB=1:3000-1:10000

注意事項 

1) 本產品為HRP直標抗體，需要避光保存于-20℃或者-80℃中； 

2) 本產品靈敏度高，WB稀釋比值請按照說明書進行，否則可能會出現非特異性條帶； 

3) PVDF 膜在轉膜前需要用甲醇激活，轉膜后抗體稀釋液盡量過量，轉膜和抗體孵育過程中不要產生氣泡； 

4) 本品在37℃下孵育30-60min即可產生很明顯的信號，常溫孵育可適當延長時間。

參考信息 

1) 樣本信息：Vero、BHK、293、Jukat、Hela、K562、NIH/3T3、CHO和EL4-B5細胞系； 

2) 樣品處理：3×106細胞PBS清洗三次后加入1mlPBS重懸，取10μl重懸液加入10μl 2×loading Buffer，100℃高溫煮沸10min； 

3) 上樣體積：10μl（含2×loading buffer）； 

4）抗體稀釋比值：25ml抗體稀釋液中加入0.5μl Anti GAPDH Antibody-HRP抗體（1:5000）； 

5) 抗體孵育條件：37℃搖晃孵育30min；

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