磁珠法質粒DNA小量提取試劑盒(預分裝)
產品線 | 產品目錄名稱 | 規格 | 貨號 | 目錄價 |
核酸提取純化 | 磁珠法質粒DNA小量提取試劑盒(預分裝) | 64T | BK0022-01 | 160 |
產品介紹
磁珠法質粒DNA抽提試劑盒采用經典的SDS堿裂解法充分裂解釋放質粒,再通過醇介導將質粒結合于納米磁珠表面,經洗雜液洗去蛋白等雜質, 最后洗脫得到高純的質粒產物。產物可用于酶切、轉化、PCR、測序等分子生物學實驗。
試劑名稱 | 64 T |
溶液 P1 | 7 ml |
溶液 P2 | 7 ml |
溶液 P3 | 7 ml |
RNase (20 mg/ml) | 700 μl |
MagET? 質粒DNA預分裝試劑板 | 1*4 |
MagET? 8孔磁棒套 | 4*2 |
注意事項
1 使用前檢查各組分是否出現沉淀。若有,請輕輕搖晃混合均勻,或37℃水浴重新溶解。
2 使用前請將 RNase(20mg/ml) 全部加入溶液 P1中,用完置于4℃保存。
使用流程
樣本預處理
1 取1-5ml 細菌培養物,加入離心管中,使用常規臺式離心機12,000rpm(~13,400×g)離心1-5 min ,盡量吸盡上清。(菌液較多時可以通過 多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。
2 向留有菌體沉淀的離心管中加入100μl 溶液P1(請先檢查是否加入RNase),使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌沉淀將菌體充分懸浮。
注意:如果菌體未徹底混勻,質粒提取量和純度會偏低。
3 向離心管中加入100 μl 溶液 P2,溫和的上下翻轉6-8次使菌體充分裂解,室溫靜置1~ 5 min(時間不宜過長),以免質粒DNA受到破壞 。
4 向離心管中加入100 μl 溶液 P3,立即溫和地上下翻轉6-8次,充分混勻,此時會出現白色絮狀沉淀。12,000rpm(~13,400×g)離心 5min,小心吸取全部上清,備用。
自動化法提取 -MagET? Smart 16
1 取出MagET? 質粒DNA預分裝試劑板,顛倒混勻數次使磁珠重懸,輕甩MagET? 質粒DNA預分裝試劑板使試劑及磁珠均集中到試劑 板底部。
注:使用前小心撕去鋁箔封口膜,避免MagET? 質粒DNA預分裝試劑板振動,防止液體濺出。
2 在MagET? 質粒DNA預分裝試劑板的第 2,8列中加入預處理的全部上清液,將MagET? 質粒DNA預分裝試劑板置于 MagET? Smart 16的底座上。
注:請在加樣后 1h 內上機運行程序。
3 將MagET? 8孔磁棒套插入 MagET? Smart 16磁棒套架卡槽內。
4 選擇程序并運行,自動化程序結束后,取下MagET? 8孔磁棒套丟棄,拿出MagET? 質粒DNA預分裝試劑板,使用移液器從MagET? 質粒DNA預分裝試劑板的第6,12列吸取出產物,即為質粒 DNA產物。如不能及時進行下游試驗,質粒DNA 樣本可短期保存于 -20℃。
表1.MagETTM Smart 16 程序設定
流程 | 工作孔位 | 名稱 | 時長 | 幅度 | 頻率 | 磁吸時間 | 轉移等待 | 溫度 | 加熱時間 |
1 | 1 | 取磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 60s | 0 | - | 0 |
2 | 2 | 結合 | 5min | 較大 | 較快 | 90s | 0 | - | 0 |
3 | 3 | 洗雜 | 1min | 較大 | 較快 | 60s | 0 | - | 0 |
4 | 4 | 洗雜 | 1min | 較大 | 較快 | 60s | 120s | - | 0 |
5 | 6 | 洗脫 | 5min | 較大 | 較快 | 90s | 0 | - | 0 |
6 | 1 | 棄磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 0 | 0 | - | 0 |