重組Taq DNA 聚合酶

Taq DNA Polymerase 

產品簡介：

Taq DNA Polymerase為來源于嗜熱菌Thermus aquaticus，經大腸桿菌重組表達純化獲得的耐熱性DNA聚合酶，分子量為 94 kDa，與天然Taq DNA 聚合酶具有相同的功能。該酶具有 5'→ 3' 聚合酶活性和 5'→3' 外切酶活性，但無3'→ 5'外切酶活性。PCR 產物的3' 端帶有突出的 A 堿基，可克隆至 T 載體。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

活性定義:

1個活性單位(U) 定義為74℃下，30 min內催化10 nmol dNTP 摻入酸不溶物所需的酶量。

蛋白純度檢測：

使用SDS-PAGE凝膠電泳檢測，蛋白純度不低于95%。

核酸內切酶活性檢測：

將5 U Taq DNA Polymerase與200 ng超螺旋質粒DNA在 37℃下，共同溫育4 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于10%的質粒DNA轉變成缺刻或線性狀態。

非特異性核酸酶活性檢測：

將5 U Taq DNA Polymerase與15 ng雙鏈DNA片段在37℃ 溫育16 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

宿主DNA殘留檢測：

使用大腸桿菌16S rDNA特異性引物探針組，采用熒光定量PCR 法檢測5 U Taq DNA Polymerase，大腸桿菌宿主基因組DNA殘留低于1 copy。

使用方法：

1. 建議的PCR反應體系

a.引物推薦終濃度為0.2 μM，效果不佳時可以在0.1~1 μM進行調整；引物長度請設定18~25 bp，GC含量為40%~60%。

b.不同模板最佳反應濃度有所不同，以50 μl體系為例：模板為基因組DNA時，一般使用量應在10~400 ng；當模板為質粒或病毒DNA時，一般使用量應在10 pg~20 ng。

2. 常規PCR反應程序

步驟	溫度	時間
預變性a	94℃	3~5 min
變性	94℃	30 s
退火	55~65℃	30 s		30~35 Cycles
延伸	72℃	30~60 s/kb
終延伸	72℃	5 min

a. 該預變性條件適合絕大多數擴增反應，對于一些復雜模板，例如：菌液、菌落（尤其是酵母）的PCR 擴增，預變性時間可適當延長至10 min，以提高預變性效果。

注: 如果使用酵母菌液作為PCR 擴增模板，建議目的片段長度不超過2.5 kb； 若超出2.5 kb,建議將酵母菌液預先進行破壁處理。

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。