化學法熱啟動Taq DNA 聚合酶

Taq-HS DNA Polymerase 

產品簡介：

Taq-HS DNA polymerase是使用小分子化合物修飾的熱啟動Taq DNA Polymerase。在 60℃以下化合物可以有效封閉 DNA 聚合酶活性，高溫下發生不可逆解離，使聚合酶恢復活性，從而有效避免低溫下的非特異性擴增。本品主要用于熒光定量PCR，尤其是 Taqman 探針法。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

活性定義:

1個活性單位(U) 定義為74℃下，30 min內催化10 nmol dNTP 摻入酸不溶物所需的酶量。

蛋白純度檢測：

使用SDS-PAGE凝膠電泳檢測，蛋白純度不低于95%。

核酸內切酶活性檢測：

將5U Taq-HS DNA polymerase與200 ng超螺旋質粒DNA在 37℃下，共同溫育4 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于10%的質粒DNA轉變成缺刻或線性狀態。

非特異性核酸酶活性檢測：

將5 U Taq-HS DNA polymerase與15 ng雙鏈DNA片段在 37℃溫育16 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

宿主DNA殘留檢測：

使用大腸桿菌16S rDNA特異性引物探針組，采用熒光定量PCR 法檢測5 U Taq-HS DNA polymerase，大腸桿菌宿主基因組DNA殘留低于1 copy。

使用方法：

1. 探針法熒光定量PCR反應體系

a. 引物推薦終濃度為 0.2 μM，效果不佳時可以在0.1~1 μM進行調整；引物長度請設定 18~25 bp，GC含量為40%~60%。最佳效率的擴增目標片段一般為80~200 bp，設計時應盡量避免發夾結構、二聚體等復雜結構，并盡可能橫跨內含子區域。

b. 探針終濃度推薦為0.25 μM，效果不佳時可以在0.1~1 μM進行調整。

c. 模板添加量不應超過總反應體系的10%，推薦加樣量為1~2 μl。不同種類DNA模板中含有的靶基因拷貝數目不同，必要時可進行梯度稀釋，以確定最佳的DNA模板添加量。

2. 探針法熒光定量PCR反應程序

步驟	溫度	時間
預變性	95℃	2 min
變性	95℃	10 s		40 Cycles
退火&延伸	60℃	30 s

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！