牛凝血酶

Thrombin, from Bovine Plasma

產品簡介：

凝血酶 (Thrombin)是凝血酶原(凝血因子II) 激活后產生的一種內切絲氨酸蛋白酶，選擇性切割纖維蛋白原的Arg-Gly鍵，釋放纖維蛋白肽A(FPA)和纖維蛋白肽B(FPB)，并且產生纖維蛋白單體，此單體經進一步聚合后，在血小板、紅細胞和白細胞等參與下形成血凝塊。體內凝血酶主要以肝臟處產生的凝血酶原形式存在，經活化的X因子切割后釋放出活化肽，以及具催化活性的α-凝血酶。α-凝血酶由一條輕鏈(Mw~6,000)和一條重鏈(Mw~31,000)通過一個二硫鍵連接而成。某些保存條件下，α-凝血酶會自溶生成β-和y-凝血酶，兩者缺乏溶纖維蛋白活性，不過保留一些活性可水解合成多肽底物以及除纖維蛋白原之外的蛋白底物。凝血酶是凝血機制中的關鍵酶，直接參與止血，促進凝血和抗凝血等生理過程中的最后一步，廣泛應用于診斷學領域，包括凝血化驗、凝血因子檢測、血液或血漿的脫纖維化用于血清質控等;

另外，由于凝血酶具有切割序列專一性強，水解效率高，且能通過親和層析方法簡易去除的特點，還廣泛用于基因工程產品的開發。用作一種工具蛋白酶，位點特異性切割融合蛋白。

本品是從牛的血漿純化制得，經S/D和干熱法兩步法完全滅活病毒，不含其他蛋白酶活性。SDS-PAGE檢測顯示無雜蛋白污染，純度高，并且提供的酶活力>2000 U/mg protein。

我們的凝血酶每500 U干粉質量約15 mg，其中含有凝血酶蛋白質大約0.25 mg，其他大部分為輔料。

該酶最適切割位點：A-B-Pro-Arg-▼-X-Y （A和B為疏水氨基酸，X和Y為非酸性氨基酸），Gly-Arg-▼-Gly。常見的識別序列為：Leu-Val-Pro-Arg-▼-Gly-Ser； Gly-Arg-▼-Gly。

保存條件: 

2~8℃干燥保存（三年有效）

產品參數：

1）CAS號（CAS NO.）：9002-04-4

2）同義名：Factor lla凝血因子lla

3）純度（Purity）：未見雜蛋白電泳條帶(SDS-PAGE)

4）酶活力（Specific Activity）：≥2000 U/mg protein

5）外觀（Appearance）：白色凍干粉或塊狀物

6）溶解性：溶于水(10 mg/ml)

7）分子量（Molecular Weight）：37 KD

8）濕度（Moisture）：≤5% w/w

產品使用：

本品有效切割質量比1:2000，通常在未做過預實驗的情況下建議在1:1000質量比進行體系的優化，即1 mg的目的蛋白加入2 U的酶（2000 U/mg），使用時可用生理鹽水（0.9%NaCl溶液）將酶配成儲存液（100 U/mL），有效消化緩沖液：20 mM Tris-HCl，含150 mM NaCl，pH 8.0。在20℃-37℃切割0.3-16 h。

酶切條件：

凝血酶酶切條件舉例：20mMTris-HCl緩沖液，含150mMNaCl，pH8.0體系中：

融合蛋白總量：100μg

凝血酶用量：0.2-0.3U

溫度：20℃-37℃

酶切時間：0.3h-16h

根據底物蛋白酶切位點的差異，可以適當調整凝血酶的工作濃度與酶切時間，以便達到較好的酶切效果。

說明：

1.      具體反應溫度可根據融合蛋白的性質而定，如需要低溫保存的蛋白，可在4℃切割24 h。

2.      因為凝血酶會吸附在玻璃上，建議用塑料管分裝凍存（-20℃）凝血酶溶液。

注意事項：

1.      此凍干產品穩定性好，2~8℃條件下保存3年，酶活力未有顯著變化。室溫條件下保存1年，酶活力未有顯著變化。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題：

Q：牛凝血酶500 U是相當于多少g？干粉是多少g？

A：我們的凝血酶每500 U中約含有凝血酶蛋白質0.25 mg，凝血酶500 U每支中干粉質量約15 mg，大部分為輔料。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！