BbvCI

產(chǎn)品簡介：

BbvCI來源于短芽孢桿菌(Bacillus brevis) (L. Ge)的BbvCI基因，經(jīng)大腸桿菌重組表達獲得。BbvCI屬于Type IIA 類限制酶，以異源二聚體形式存在，由兩個不同的催化亞基構(gòu)成，每個亞基具有獨立的切割位點。BbvCI識別并切割非回文序列CCTCAGC(-5/-2)，形成5'端3堿基突出的粘性末端。BbvCI使用FastCut反應(yīng)緩沖液，可與其他FastCut系列限制酶進行雙酶切，但不建議長時間酶切（超過3 h），以避免產(chǎn)生星號活性。

識別位點：

CCTCAGC
5'...C C↓T C A G C...3'
3'...G G A G T↑C G ...5'

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× FastCut Buffer；

37℃溫育；

參照“DNA酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在激活劑存在下，50 μl反應(yīng)體系中，37℃ 1 h 內(nèi)完全酶切1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性檢測：

37℃下，2 U BbvCI能夠在15 min內(nèi)完全消化1 μg λDNA。

超長時間溫育檢測：

37℃下，將2 U BbvCI與1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測：

37℃下，使用2 U BbvCI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將＜10%的酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開95%以上連接產(chǎn)物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響BbvCI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育1~3 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

不同DNA中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。

注意事項：

1.      反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

2.      限制性內(nèi)切酶存儲緩沖液中的添加劑（例如甘油、鹽）與底物溶液中的污染物（例如鹽、EDTA或乙醇等）相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強;

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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