XmnI

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

XmnI屬于Type IIP型限制酶，來源于木薯萎蔫病黃單胞菌(Xanthomonas manihotis)，經(jīng)大腸桿菌重組表達(dá)后純化獲得。XmnI識(shí)別并切割GAANN/NNTTC序列，切割后形成平末端，在Cut Buffer C中表現(xiàn)最佳的性能與星號(hào)活性控制。XmnI可兼容通用 FastCut Buffer，方便與其他內(nèi)切酶聯(lián)用實(shí)現(xiàn)快速雙酶切，但應(yīng)避免長時(shí)間酶切，以防止出現(xiàn)星號(hào)活性。

識(shí)別位點(diǎn)：

GAANNNNTTC
5'...G A A N N↓N N T T C...3'
3'...C T T N N↑N N A A G ...5'

同裂酶：PdmI, MroXI

注：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× Cut Buffer C；
37℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對(duì)于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

對(duì)于被EcoBI甲基化的DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在激活劑存在下，50 μl反應(yīng)體系中，37℃ 1 h 內(nèi)完全酶切1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性檢測(cè)：

37℃下，10 U XmnI能夠在15 min內(nèi)完全消化1 μg λDNA。

超長時(shí)間溫育檢測(cè)：

37℃下，將10 U XmnI與1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解。延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

酶切-連接-再酶切檢測(cè)：

37℃下，使用10 U XmnI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會(huì)影響XmnI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育1~3 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1.      XmnI使用FastCut Buffer進(jìn)行酶切時(shí)，酶切反應(yīng)時(shí)間建議不超過1 h。

2.      反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號(hào)活性；

3.      限制性內(nèi)切酶存儲(chǔ)緩沖液中的添加劑（例如甘油、鹽）與底物溶液中的污染物（例如鹽、EDTA或乙醇等）相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強(qiáng);

4.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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