BODIPY 581/591 C11 脂質(zhì)過氧化檢測熒光探針

Lipid Peroxidation Probe, BODIPY 581/591 C11

產(chǎn)品簡介：

脂質(zhì)過氧化物是由不飽和脂肪酸在活性氧的作用下生成的物質(zhì)。這些過氧化脂質(zhì)會(huì)進(jìn)一步氧化脂質(zhì)，從而在連鎖反應(yīng)中不斷積累脂質(zhì)過氧化物。過量的脂質(zhì)過氧化物會(huì)分解成丙烯醛（Acrolein）、丙二醛（Malondialdehyde, MDA）、4-羥基-2-壬烯醛（4-Hydroxy-2-nonenal, 4-NHE）等高活性醛類物質(zhì)，對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。此外，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)二價(jià)鐵離子濃度過高時(shí)，過量的二價(jià)鐵離子會(huì)與活性氧共同作用，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的積累，引發(fā)鐵死亡。因此，細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)過氧化物水平對人體產(chǎn)生多方面影響，甚至可能引發(fā)包括動(dòng)脈硬化在內(nèi)的多種疾病。

BODIPY 581/591 C11 脂質(zhì)過氧化檢測熒光探針是一種能夠檢測脂質(zhì)過氧化物形成的熒光探針。這種探針對脂質(zhì)過氧化物本身無反應(yīng)，但能與脂質(zhì)過氧化過程中的脂質(zhì)自由基等發(fā)生反應(yīng)，從而檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平。該熒光探針在正常狀態(tài)下發(fā)出紅色熒光，隨著脂質(zhì)過氧化的進(jìn)行，熒光從紅色變?yōu)榫G色。通過紅色和綠色兩種顏色熒光強(qiáng)度的比值，可以高靈敏度地檢測脂質(zhì)過氧化物的形成。

BODIPY 581/591 C11 脂質(zhì)過氧化檢測熒光探針是一種脂溶性的比率型熒光探針，用于模式膜系統(tǒng)和活細(xì)胞中指示脂質(zhì)過氧化和抗氧化性能。該探針具有以下優(yōu)點(diǎn)：①發(fā)射波長位于電磁波譜的可見光區(qū)域，非氧化態(tài)（591nm）和氧化態(tài)（510nm）的光譜能夠很好地分離；②具有高量子產(chǎn)率，因此即使使用低標(biāo)記濃度，也能確保對膜的干擾最小，同時(shí)保持良好的信噪比；③光穩(wěn)定性好，產(chǎn)生的熒光偽影低；④對環(huán)境變化如pH或溶劑極性基本不敏感；⑤親脂性，易于進(jìn)入膜結(jié)構(gòu)；⑥一旦氧化，探針保持親脂性，不會(huì)自發(fā)離開脂質(zhì)雙分子層；⑦非氧化態(tài)和氧化態(tài)在脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的定位不同，一種位于較淺層（距離雙分子層中心約18埃），一種位于較深層（距離雙分子層中心小于7.5埃）；⑧高達(dá)50μM的濃度對大鼠成纖維細(xì)胞無毒性；⑨對各種氧自由基和過氧亞硝酸鹽敏感，但對超氧化物、一氧化氮、過渡鐵離子和氫過氧化物不敏感；⑩其氧化靈敏度與內(nèi)源性脂肪酰基團(tuán)相當(dāng)。BODIPY 581/591 C11 脂質(zhì)過氧化檢測熒光探針可用于定量檢測鐵死亡。

保存條件: 

-20℃避光保存（兩年有效）

化學(xué)及光譜特性：

各檢測儀器的推薦的檢測波長和濾光片：

母液制備（1mg本品）：

產(chǎn)品使用：

1.      BODIPY 581/591 C11的配制：

1)     母液配制：使用高純度無水DMSO將1mg BODIPY 581/591 C11配制成1-10mM母液（推薦2mM濃度）。注意：第一次使用時(shí)請將配制好的母液分裝成小包裝后-20℃或-80℃避光保存，以避免反復(fù)凍融。

2)     工作液配制：使用PBS或者培養(yǎng)基將母液稀釋1000倍配制成工作液（推薦2μM濃度）。但因不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系，可通過預(yù)實(shí)驗(yàn)在2-10μM范圍內(nèi)摸索最佳工作濃度。注意：配制BODIPY 581/591 C11染色工作液時(shí)注意避光，且須現(xiàn)配現(xiàn)用，不宜保存后使用。

工作液使用量推薦：對于貼壁細(xì)胞，6孔板每孔所需BODIPY 581/591 C11染色工作液的量為1ml，96孔板所需的工作液為100μl，其它培養(yǎng)器皿的染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50-100萬細(xì)胞需0.5ml BODIPY 581/591 C11染色工作液。

2.      陽性對照的設(shè)置（可選）：

將叔丁基過氧化氫（t-BHP）按照200μM的濃度加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，處理細(xì)胞2-4h。隨后按照步驟3/4加入BODIPY 581/591 C11染色工作液，進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的檢測。

3.      對于懸浮細(xì)胞：

1)     細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行一定處理后，計(jì)數(shù)。取適當(dāng)細(xì)胞600×g室溫離心5min，棄上清，加入適當(dāng)體積的BODIPY 581/591 C11染色工作液重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度為100萬-1000萬/ml。

2)     細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育10-30min，不同的細(xì)胞最佳孵育時(shí)間不同。以20min作為初始孵育時(shí)間，根據(jù)作用細(xì)胞對孵育時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化以得到最佳的效果。

3)     37℃孵育結(jié)束后，600×g 4℃離心3-4min，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。

4)     用PBS洗滌2次：加入1ml PBS重懸細(xì)胞，600×g 4℃離心3-4min，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入1ml PBS重懸細(xì)胞，600×g 4℃離心3-4min，沉淀細(xì)胞，棄上清。

5)     再用適量PBS重懸細(xì)胞后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。

4.      對于貼壁細(xì)胞：

注：對于貼壁細(xì)胞，如果希望采用流式細(xì)胞儀檢測，可以先消化并收集細(xì)胞，重懸后參考懸浮細(xì)胞的檢測方法。

1)     對于6孔板的一個(gè)孔，吸除培養(yǎng)液，根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)，如有必要可以用PBS或其它適當(dāng)溶液洗滌細(xì)胞一次。如果使用其它的多孔板，各種試劑的用量需要相應(yīng)按比例調(diào)整。

2)     加入1ml BODIPY 581/591 C11染色工作液。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育10-30min，不同的細(xì)胞最佳孵育時(shí)間不同。以10min作為初始孵育時(shí)間，根據(jù)作用細(xì)胞對孵育時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化以得到最佳的效果。

3)     37℃孵育結(jié)束后，吸除上清，用PBS洗滌2次。

4)     加入2ml PBS，熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下觀察。如果考慮使用熒光酶標(biāo)儀檢測，優(yōu)先推薦使用全黑96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或黑色透明底96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，分別進(jìn)行頂讀或底讀模式進(jìn)行熒光檢測。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光探針均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      本試劑盒僅限用于活細(xì)胞的檢測。

3.      不建議使用除說明書以外的緩沖液制備工作溶液。BODIPY 581/591 C11具有高脂溶性，在無血清培養(yǎng)基中制備可能導(dǎo)致探針沉積，請使用含血清培養(yǎng)基進(jìn)行制備。。

4.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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