外泌體提取純化試劑盒-柱法（細胞上清）

 【溫馨提示】：見我司整理的專注外泌體研究，外泌體提取專家，專注外泌體提取試劑盒產品專題。

產品簡介：

外泌體是由細胞分泌的包含 RNA和蛋白質的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認為具有細胞間信使的功能，在特定細胞之間傳遞它們的效應物或信號分子；然而其構造、效應物組成以及所參與的生物學通路目前尚不明晰。

外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。由本公司自主開發的外泌體提取純化試劑盒，適用于細胞培養上清液（也可用于尿液）中的外泌體提取純化，5T可以提取100ml細胞上清液。試劑盒采用陰離子交換色譜法原理，與被分離樣品中帶負電荷的外泌體相結合，從而實現外泌體的分離。該試劑盒具有快速、高效、獲得的外泌體純度高等特點，可用于電鏡分析、NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細胞學實驗和動物實驗等。

保存條件: 

室溫保存，2年有效。

產品組成：

* Nuclease-free, Sterile

自備材料：

高速離心機，0.45 μm或0.22 μm過濾器， 100 KD 超濾柱、鐵架臺。

產品使用：

一、 樣品預處理

1.      取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后置于4℃解凍，融化后置于冰上；如果是新鮮樣品，收集樣品后直接置于冰上；

2.      樣品處理量（單個柱子處理量）：

注：每個“Exosome Extraction Column”處理量 10~20 mL（未經濃縮的原始上清），樣品過少可能導致獲得的外泌體濃度低，樣品過多可能導致堵柱。

3.      離心去細胞：樣品于4℃以300 ×g（~1,640 rpm**） 離心5 min，去除樣品中的細胞； **為約10 cm有效離心半徑的大離心機換算（≥15 mL離心管），下同。

4.      離心去細胞碎片：將去除細胞后的樣品于4℃以3,000 ×g（~5,200 rpm**）離心10 min，去除樣品中的細胞碎片（注：若沉淀較多，可3,000 ×g，10 min離心多次至無明顯沉淀，每次取離心上清液）；

5.      上清液過濾：去除細胞碎片的離心上清液用 0.45 μm 或0.22 μm過濾器過濾至新的容器中。

二、 提取前準備

1.      固定外泌體提取柱（Exosome Extraction Column）：取出提取柱，將提取柱上下篩板取下后垂直固定于試管架或鐵架臺上，待填料保存液自然流盡；

2.      加入Solution A溶液：填料保存液流盡后沿柱子內壁緩慢加入5 mL Solution A溶液，待Solution A溶液自然流盡；

3.      加入Solution B溶液：Solution A流盡后沿柱子內壁緩慢加入5 mL Solution B溶液，待 Solution B溶液 自然流盡，等待上樣。

三、 提取外泌體

1.      過柱：將經0.45 μm或0.22 μm過濾器過濾后的細胞上清液沿柱子內壁緩慢多次加入提取柱中，待細胞上清液自然流盡（注：每個“Exosome Extraction Column”上樣量10~20 mL（未經濃縮的原始上清），樣品過少可能導致獲得的外泌體濃度低，樣品過多可能導致堵 柱）；

2.      平衡：細胞上清液流盡后沿柱子內壁緩慢多次加入 15 mL Solution B 溶液，待Solution B溶液自然流盡；

3.      洗雜：Solution B溶液流盡后沿柱子內壁緩慢加入 0.8 mL Solution C 溶液，待Solution C溶液自然流盡；

4.      洗脫：待上步驟中Solution C溶液流盡后沿柱子內壁再次緩慢加入1 mL Solution C溶液，收集該流穿液（該流穿液中富含外泌體顆粒）；

5.      濃縮（選做）：若外泌體濃度過低，可用100 KD超濾柱將流穿液適當濃縮；

6.      純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗品轉入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3,000 ×g（~6,200 rpm*）離心10 min，離心后收集EPF 柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體（注：EPF 柱不可重復使用）；

*為約7 cm有效離心半徑的小離心機換算（≤2 mL離心管）。

7.      外泌體的保存：純化后的外泌體以合適體積進行分裝凍存于-80℃低溫冰箱中，以備后續實驗使用。

注意事項：

1.      新的Exosome Extraction Column柱子的上篩板和填料表面之間可能存在一定的空隙，該現象是運輸過程中晃蕩造成的，并不影響其性能，實驗前將篩板向下推動至填料表面即可；

2.      Exosome Extraction Column 和 Exosome Purification Filter 均為一次性耗材，請勿重復利用，否則可能會造成堵柱而損失樣品；

3.      Solution C 為 Tris 緩沖鹽溶液；

4.      流穿液呈紅色，是由于培養基中色素和外泌體同時被洗脫所致，不影響后續實驗。若需去除色素，可使用100 KD超濾柱置換緩沖液；

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！

相關產品：