T7 RNA聚合酶

T7 RNA Polymerase 

產品簡介：

本產品是大腸桿菌重組表達來源的噬菌體T7 RNA聚合酶，是一種依賴DNA的RNA聚合酶，對噬菌體T7啟動子序列具有高度特異性。T7 RNA聚合酶以含有T7啟動子序列的雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，合成與啟動子下游的單鏈DNA互補的RNA。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

適用范圍：

1. 合成單鏈RNA，包括mRNA，siRNA，gRNA等各類RNA的前體。
2. 合成標記或未標記的高特異性RNA探針。 
3. 利用帽子類似物合成加帽的mRNA。

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在 37℃ 1 h 內使1 nmol ATP摻入酸不溶性 沉淀物所需要的酶量。

蛋白純度檢測：

使用SDS-PAGE凝膠電泳檢測，蛋白純度不低于95%。

核酸內切酶活性檢測：

將酶液與超螺旋質粒DNA在37℃ 溫育4 h，通過 DNA 電泳檢測質粒無變化。

DNase 活性檢測：

將酶液與雙鏈DNA底物在37℃溫育16 h，通過DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

RNase 活性檢測：

將酶液與 RNA 在37℃溫育1 h，通過電泳檢測RNA無降解。

功能檢測：

體外轉錄合成實驗，通過 RNA 電泳可以檢測到目的條帶。

使用方法：

推薦反應體系（20 μl）

注1：建議加完Nuclease-Free Water，再加CTP / GTP/ ATP/ UTP。

注2：NTP用量影響轉錄產量，推薦的NTP用量下1 μg模板可獲得約150~200 μg RNA，減少NTP用量會降低轉錄產量。

推薦反應條件：

37℃反應1 h，若轉錄長度＜300 nt可延長反應時間至2~16 h。反應結束后，可向上述20 μl反應液中加入1 μl dsDNase，37℃ 孵育15 min用于去除DNA模板。

注意事項：

1.      模板DNA的純度對體外轉錄反應至關重要。質粒DNA抽提過程中引入的RNase A殘留會顯著影響轉錄RNA的質量，建議使用OD260/280為1.8~2.0的高純度RNase-free質粒。

2.      模板DNA可通過線性化環狀質粒或PCR獲得。模板DNA上游需含有T7啟動子序列，下游為平末端或編碼鏈5'末端突出。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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